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國(guó)產(chǎn)液相色譜柱的一些技術(shù)性操作體驗(yàn)

更新時(shí)間:2017-07-27      瀏覽次數(shù):2082
     國(guó)產(chǎn)液相色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來(lái),作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照國(guó)產(chǎn)液相色譜柱出廠(chǎng)報(bào)告中的條件進(jìn)行,只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。
    1、樣品的前處理。
    a、使用流動(dòng)相溶解樣品。
    b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
    c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。
    2、流動(dòng)相的配制
    國(guó)產(chǎn)液相色譜柱是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
    a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
    b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。
    c、流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長(zhǎng)泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
    d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器,使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
    e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。
    f、在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
    3、流動(dòng)相流速的選擇
    因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱,要追求*柱效,使用*流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
    當(dāng)選用*流速時(shí),分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。國(guó)產(chǎn)液相色譜柱采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
    國(guó)產(chǎn)液相色譜柱注意:
    a、含水流動(dòng)相在實(shí)驗(yàn)前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜。加入*,防止細(xì)菌生長(zhǎng)。
    b、流動(dòng)相要求使用0.45 μm濾膜過(guò)濾,除去微粒雜質(zhì)。
    c、使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相,使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,提高柱性能。

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